梅毒诊断确诊還是较为艰难，许多 病人在初期的情况下是沒有过多的症状表现，绝大多数病人都只可以根据血液定期检查光学显微镜查验等新项目来做到确诊的功效，假如仅仅依照人眼辨别便会出現许多 的误差，除非是是症状表现早已来到中后期的情况下，出現了很显著的皮疹和红斑后就可以分辨出去梅毒。临床医学上，没办法从外型初期确诊出梅毒。其确定须通过血液检验或应用光学显微镜注视观查。血液检验由于较非常容易开展因此比较常见，但诊断检测没法区别病症的期别。
一、血液检验
血液检验分为非梅毒螺旋体及梅毒螺旋体检验。前期会应用非梅毒螺旋体检验，在其中并包含性病科学研究实室(VDRL)及迅速血液反映素实验。但是因为这类检验有时候会出現伪呈阳性，因而需要运用梅毒螺旋体胶状物颗粒物凝结(TPHA)或荧光梅毒螺旋体抗原消化吸收实验(FTA-Abs)这类的梅毒螺旋体检验来确定。一部分病毒性感染感染如水痘及麻疹，及其淋巴瘤、结核病、登革热病、心内膜炎、结缔组织病症及怀孕等都可能会导致非梅毒螺旋体检验出現伪阳性反应。梅毒螺旋体抗原实验一般会在前期感染二到五礼拜后获得阳性反应。在己知感染梅毒的状况下，可借由在脑脊髓液中发觉很多的白血球低（主要是网织红细胞）及很多蛋白来确诊神经性梅毒。
二、实验室检查
1、暗视野光学显微镜查验
取病人的异常皮损（如硬下疳、偏平湿疣、湿丘疹等），在暗视野显微镜下查验，看到可健身运动的梅毒螺旋体，可做为梅毒的诊断根据。
2、梅毒血清学实验
梅毒血清学实验方式许多 ，常用抗原体有非球菌抗原体（心不饱和脂肪酸抗原体）和梅毒螺旋体特异性抗原体两大类。前面一种有迅速血液反映素环形卡牌实验（RPR）、甲苯胺红不加温血清学实验（TRUST）等，可做定量分析实验，用以分辨功效、分辨病况活动水平。后面一种有梅毒螺旋体颗粒物凝结实验（TPPA）、梅毒螺旋体酶联免疫吸咐实验（TP-ELISA）等，特异性强，用以TP感染的确诊。
梅毒螺旋体IgM抗体检测：感染梅毒后，最先出現IgM抗原，伴随着病症发展趋势，IgG抗原接着才出現并渐渐地升高。经合理医治后IgM抗原消退，IgG抗原则持续存有。TP-IgM抗原不可以根据胚胎，假如宝宝TP-IgM呈阳性则表明宝宝已被感染，因而，TP-IgM抗体检测对确诊宝宝的胎传梅毒实际意义挺大。
3、脑脊液检查
梅毒病人出現神经症状者，或是历经驱梅医治失效者，应作脑脊液检查。这一查验对神经梅毒的确诊、医治及预后的分辨均有协助。检查项目应包含：细胞计数、总蛋白测量、RPR及TPPA实验等。