核酸检测通常包括样本采集、核酸提取、扩增检测等步骤,需由专业人员在特定环境下规范操作。检测过程中需严格遵守生物安全要求,避免样本污染或交叉感染。
1、样本采集
常用鼻咽拭子或口咽拭子采集上呼吸道分泌物。操作时需将拭子插入鼻腔或口腔深处,轻轻旋转擦拭黏膜表面,停留数秒吸附分泌物。采样后需立即将拭子放入含病毒保存液的密封管中,低温保存并及时送检。
2、核酸提取
实验室人员在生物安全柜内对样本进行灭活处理,使用裂解液破坏病毒蛋白外壳释放核酸。通过离心柱吸附法或磁珠法分离纯化RNA,去除样本中的蛋白质、细胞碎片等干扰物质,最终得到较纯净的核酸溶液。
3、扩增检测
采用实时荧光定量PCR技术,将提取的核酸与引物、探针、酶等试剂混合。通过反复升温降温实现核酸序列的指数级扩增,荧光探针与目标序列结合后释放信号,仪器实时监测荧光值变化。通常需要经过逆转录、预变性、扩增等40个左右循环,最终根据扩增曲线判定结果。
进行核酸检测时需全程做好个人防护,检测后应立即洗手消毒。若自行使用抗原检测试剂盒,需严格按照说明书操作,观察区出现质控线才能判定结果有效。若检测结果异常或出现疑似症状,应及时到正规医疗机构复检,避免因采样不当或试剂失效导致误判。