低血糖的诊断标准通常以血糖浓度为主要依据，同时结合临床症状进行综合判断。一般情况下，健康成年人空腹血糖低于2.8mmol/L或糖尿病患者血糖小于等于3.9mmol/L即可提示低血糖。
低血糖的诊断需符合Whipple三联征：首先出现心悸、出汗、手抖、饥饿感等自主神经兴奋症状，或注意力不集中、嗜睡等中枢神经缺糖症状；其次即刻血糖检测显示低于上述标准；最后在补充葡萄糖后症状迅速缓解。这三项条件同时满足时，可明确诊断为低血糖。
对于糖尿病患者，尤其是使用胰岛素或磺脲类药物的患者，血糖小于等于3.9mmol/L即需按低血糖处理。特殊人群如新生儿低血糖诊断标准为血糖小于2.2mmol/L。若反复出现低血糖症状，建议通过72小时动态血糖监测、胰岛素测定等手段排查胰岛素瘤、肾上腺功能不全等病因。日常出现疑似症状时应立即检测指尖血糖，及时补充15-20g葡萄糖并复测血糖，若情况未改善需尽快就医。