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电泳实验操作需注意哪些要点

汤多壮 血液内科 副主任医师

南昌大学第二附属医院 三甲

电泳实验操作需注意环境安全、制胶均匀、样品处理、电压控制、转膜充分等要点。合理规范的实验操作可提高结果的准确性,同时避免潜在风险。

电泳实验需在通风良好的环境中进行,避免接触有毒试剂如溴化乙锭。操作前需佩戴防护手套,并规范处理废弃凝胶及液体。制胶时应确保胶板清洁,灌胶速度均匀以减少气泡产生,待凝胶完全凝固后再进行后续操作。样品需预先离心去除杂质,上样量需根据胶孔容量精确控制,避免溢出或量不足导致条带模糊。

电泳槽需加入新鲜配制的缓冲液,液面需浸没电极但不超过胶面。根据目的蛋白分子量选择合适电压,通常控制在80-120V范围内,过高电压会导致产热加速凝胶融化。电泳过程中需观察指示剂迁移位置,必要时调整参数。转膜阶段需确保滤纸、凝胶和膜紧密贴合,避免产生气泡影响转印效率。

实验结束后应及时关闭电源,拆卸电泳槽时避免液体溅洒。凝胶染色与脱色需控制时间,避免过度脱色导致条带丢失。所有接触染料的器具需单独清洗,实验台面需用75%乙醇擦拭消毒。注意不同电泳类型如SDS-PAGE、琼脂糖电泳的具体参数差异,保存实验数据时应详细记录电压、缓冲液pH值等关键参数。

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