神门穴位于手腕掌侧横纹的尺侧端，具体在尺侧腕屈肌腱的桡侧凹陷处。取穴时可先找到腕横纹，沿小指侧向下触摸至明显的肌腱（尺侧腕屈肌腱），其外侧的凹陷即为该穴位。
神门穴属于手少阴心经，是临床常用的穴位之一。其定位依据体表解剖标志，以腕横纹和尺侧腕屈肌腱作为参考点。尺侧腕屈肌腱在握拳屈腕时更为明显，桡侧凹陷处可触及动脉搏动，此处皮肤较薄，按压时可能产生酸胀感。
取穴时建议保持手腕放松，手掌向上平放。若自行定位困难，可咨询中医师通过体表触诊确认。正确刺激该穴位需注意力度适中，避免过度按压造成软组织损伤。孕妇、局部皮肤破损或患有严重心血管疾病者应谨慎操作。