血细胞计数板计算细胞数量通常分为样本制备、计数区域选择和公式计算三个步骤。具体操作需严格按照规范进行，以减少误差并保证结果准确性。
1、样本制备
将细胞悬液充分混匀后，用微量移液器吸取约10μl样本。沿盖玻片边缘缓慢注入计数室，利用毛细作用使液体自然充满网格区域，避免产生气泡。若细胞密度过高，需用生理盐水或培养基进行适当稀释。
2、计数区域选择
根据细胞浓度选择计数区域。通常采用四角的大方格（每个面积1mm²）或中央的25小方格区域（0.04mm²/格）。使用显微镜10倍物镜观察，40倍物镜计数。计数时遵循"计上不计下，计左不计右"原则，对压线细胞只计数相邻两条边界的细胞。
3、公式计算
原始浓度（个/ml）=（四大格细胞总数/4）×稀释倍数×10⁴。若计数中央25小格，则公式为（25小格总数）×稀释倍数×10⁴。其中10⁴由计数室高度0.1mm（对应10⁻4ml）换算得来。例如四大格计得200个细胞，稀释5倍时，浓度为（200/4）×5×10⁴=2.5×10⁶个/ml。
实际操作时需注意：盖玻片需紧密贴合计数板，样本静置1分钟待细胞沉降。建议双人分别计数取平均值，同一样本应重复检测2-3次，误差控制在10%以内。若细胞聚集成团超过总数量5%，需重新制备样本。计数完成后应及时用75%乙醇清洁计数板，避免结晶物残留影响后续检测。