硬下疳一般能通过临床表现和实验室检查准确诊断，但需与其他皮肤溃疡性疾病相鉴别。早期规范的医学评估可显著提高诊断准确性，患者需积极配合医生进行相关检查。
硬下疳作为一期梅毒的典型表现，具有特征性体征。其典型皮损为单发、无痛性溃疡，基底光滑呈软骨样硬度，边缘整齐隆起，伴随局部淋巴结无痛性肿大。医生通过观察溃疡形态、触诊硬结特征及询问高危性行为史，可初步建立临床诊断。
实验室检查是确诊的核心依据。暗视野显微镜检查能在溃疡渗出液中直接观察到梅毒螺旋体，特异性达95%以上。血清学检测包括非特异性试验（如RPR）和特异性试验（如TPPA），两者联合检测的准确性超过99%。对于临床表现不典型者，需与生殖器疱疹、软下疳、固定性药疹等进行鉴别，必要时进行组织病理学检查。
出现疑似硬下疳皮损时应立即至皮肤性病科就诊，避免自行用药或挤压病灶。诊断过程中需完整提供病史信息，包括发病时间、性接触史等。早期确诊后规范使用青霉素治疗可实现完全治愈，延误诊治可能导致病情进展为二期或三期梅毒。