外周血单个核细胞分离是指从血液中提取淋巴细胞和单核细胞的过程，通常用于免疫学或分子生物学研究。该技术主要通过密度梯度离心法实现，能够有效分离出高纯度的目标细胞群。
1、密度梯度离心法
将抗凝血与分离液如Ficoll置于离心管中，经特定离心条件处理后，血液会形成不同密度层次。红细胞和粒细胞因密度较大沉于管底，而密度较低的单个核细胞集中于血浆与分离液交界处形成白膜层，这是最常用的分离方法。
2、细胞成分获取
PBMC主要包括T淋巴细胞、B淋巴细胞和单核细胞，这些细胞在免疫应答中起核心作用。分离后的细胞需经过洗涤步骤去除血小板和残留血浆蛋白，通常使用磷酸盐缓冲液进行2-3次离心清洗。
3、实验应用价值
获得的PBMC可直接用于流式细胞分析、细胞培养或基因表达研究。保持细胞活力是关键，操作需在生物安全柜中进行，全程使用预冷试剂并控制离心温度在18-20℃。
进行PBMC分离时需注意严格无菌操作，分离后建议立即进行细胞计数和活力检测。若需长期保存，应采用程序降温法冻存细胞，使用含10%DMSO的冻存液可有效维持细胞活性。