大椎穴位于人体后正中线上，通常可以通过体表标志定位、骨度分寸定位以及简便取穴法三种方法确定其具体位置。该穴位是督脉与手足三阳经的交会穴，临床应用广泛。
1、体表标志定位法
正坐低头时，颈后部正中线处可触及明显的骨性突起，此为第七颈椎棘突。大椎穴即位于该棘突下方的凹陷处，约与肩部平齐。此方法适用于大多数人，但需注意颈椎退行性病变患者可能存在棘突形态改变。
2、骨度分寸定位法
根据中医骨度测量法，从后发际线至第七颈椎棘突的距离约为3寸。实际操作时可沿后发际线向下触摸，触及的第一个明显突起为第七颈椎棘突，其下方凹陷即为大椎穴。这种方法需结合触诊技能，适合医疗专业人员使用。
3、简便取穴法
受检者头部左右缓慢转动时，医者可用食指触摸颈后部，能随头部转动而活动的棘突为第六颈椎，其下方固定不动的棘突为第七颈椎，该棘突下缘凹陷即为大椎穴。此方法可避免将第一胸椎误认为第七颈椎。
准确定位大椎穴对针灸疗效至关重要，若需进行艾灸、刮痧或针刺治疗，建议在专业中医师指导下操作。自行取穴时应注意保持体位端正，触摸定位要轻柔，避免过度按压颈动脉窦区域。穴位局部存在皮肤破损或感染者不宜施治。