破伤风抗毒素注射的最佳时间一般为受伤后24小时内，越早使用效果越好。若超过24小时，仍建议在医生指导下视情况使用，同时可能需要联合破伤风类毒素疫苗进行免疫。
1、受伤后24小时内
破伤风抗毒素的主要作用是中和伤口中游离的破伤风毒素。由于破伤风梭菌产生的毒素扩散至神经系统的时间通常为3-14天，在受伤24小时内注射可有效中和毒素，阻止其与神经组织结合，此时预防效果最佳。尤其是被铁锈、泥土污染的深部伤口，或被动物咬伤等情况更需及时处理。
2、超过24小时未满2周
若因各种原因未能在24小时内注射，仍建议在受伤后2周内尽快补种。虽然部分毒素可能已与神经结合，但破伤风抗毒素仍可中和血液中尚未结合的毒素，降低感染风险。此时需根据伤口污染程度、患者免疫状态等综合评估，可能需要调整剂量或联合破伤风免疫球蛋白。
3、特殊伤口处理
对于存在组织坏死、异物残留或严重污染的伤口，即使超过24小时，在彻底清创后仍需注射。这类伤口易形成厌氧环境，持续存在破伤风梭菌繁殖风险。临床常采用抗毒素注射联合3-6个月的破伤风类毒素疫苗全程免疫，建立双重保护机制。
受伤后应立即用流动清水冲洗伤口至少15分钟，并用碘伏消毒。无论是否超过24小时，建议及时到急诊科或外科就诊。医务人员会根据伤口类型、污染程度及既往免疫史，决定是否需要注射破伤风抗毒素或免疫球蛋白，并判断是否需加强破伤风类毒素疫苗接种。切勿因超过24小时就自行放弃预防治疗。