少府穴的准确位置通常位于手掌第四、五掌骨之间，可通过握拳姿势、解剖标志以及体表定位等方法确定。具体定位时需结合手部姿势及周围结构进行判断。
1、握拳姿势定位
握拳时，小指尖所指的位置即为少府穴。此时掌心横纹的凹陷处可触及第四、五掌骨之间的间隙，穴位位于此区域。该方法适用于快速寻找大致位置。
2、解剖标志定位
少府穴位于手掌面，第四掌骨与第五掌骨中段交界处的凹陷中。具体可沿无名指与小指之间的指蹼向手腕方向触摸，在掌指关节后方的骨缝处定位，此处皮肤褶皱形成的凹陷为参考标志。
3、体表测量定位
从手掌远端横纹（掌指关节连线）向近端量约1横指（约1.5厘米），在第四、五掌骨之间的中点处即为穴位所在。此方法需结合手部自然放松姿势，掌心略微屈曲时更易准确定位。
少府穴属手少阴心经，定位时建议在专业医师指导下通过触摸骨性标志确认。若需进行针灸或按摩，应避免自行操作，以免误伤神经血管。临床取穴常需结合解剖学知识与触诊技巧，必要时可借助医学影像辅助确认。