蛋白质与双缩脲试剂反应通常表现为颜色变化，其原理涉及特定化学键的识别，常用于实验室检测。这一反应的核心在于双缩脲试剂与肽键的相互作用，能够帮助判断蛋白质的存在及浓度。
1、颜色变化现象
当蛋白质溶液与双缩脲试剂混合后，溶液会呈现紫色或紫红色。这种颜色变化的深浅程度与蛋白质浓度呈正相关，浓度越高颜色越深。该反应不需要水浴加热，可直接在常温下观察结果，操作简便。
2、络合反应原理
双缩脲试剂中的氢氧化钠提供碱性环境，铜离子在碱性条件下与蛋白质分子中的肽键（-CO-NH-）发生络合反应。每个铜离子与4个肽键中的氮原子结合，形成稳定的紫红色络合物。这种反应具有特异性，仅与含两个及以上肽键的物质发生显色。
3、检测应用范围
该反应广泛用于实验室的蛋白质定性及半定量检测，如生物样本中总蛋白含量的测定。相较于其他检测方法，双缩脲法对蛋白质结构完整性要求较低，可检测不同变性的蛋白质，但不能区分蛋白质种类，需结合其他方法进行精确分析。
进行该实验时需注意试剂添加顺序，应先加双缩脲试剂A液（氢氧化钠）营造碱性环境，再加B液（硫酸铜）进行反应。若样本含有高浓度铵盐或某些氨基酸（如脯氨酸），可能出现假阳性或干扰显色，需通过空白对照排除干扰因素。
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