足三里穴位于小腿前外侧，通常有三种常用定位方法，即标准定位法、体表标志法和简便取穴法，准确定位有助于发挥其功效。
1、标准定位法
足三里穴在犊鼻穴下3寸，距胫骨前嵴外一横指处。犊鼻穴位于膝盖髌骨下缘外侧凹陷，由此垂直向下量取四横指即为3寸，再向外侧移动一横指宽度即可触及该穴位。此方法为教材标准定位依据。
2、体表标志法
取坐位屈膝90度，可见膝盖骨外侧凹陷的外膝眼（即犊鼻穴）。以食指至小指四指并拢作为3寸量取基准，从外膝眼垂直向下量至四指宽度位置，再向胫骨外侧缘旁开食指宽度，按压有酸胀感处即为穴位所在。
3、简便取穴法
站位或坐位时，用同侧手掌虎口围住髌骨上缘，其余四指自然下垂，中指指尖所指位置向外侧旁开一横指处。此时可触及胫骨前肌与趾长伸肌之间的凹陷，按压有明显酸麻胀痛感时可确认穴位。
日常使用该穴位进行保健时，建议前往正规医疗机构由针灸科医师进行体表定位。艾灸或按摩操作需注意控制温度与力度，阴虚内热体质者慎用灸法，孕妇应在专业医师指导下使用。