杜氏肌营养不良的确诊需结合临床表现、实验室检查及基因检测综合分析。主要确诊手段包括血清肌酸激酶检测、基因检测、肌肉活检等，具体需由医生根据病情选择。
1、血清肌酸激酶检测
DMD患者血液中肌酸激酶水平通常显著升高至正常值的10-100倍，该指标是初筛的重要依据。新生儿期即可出现异常，但需排除其他肌病可能。
2、基因检测
通过多重连接探针扩增或二代测序技术，可检测DMD基因是否存在外显子缺失、重复或点突变。约95%患者可检出明确致病突变，是目前确诊的首选方法。
3、肌肉活检
对于基因检测阴性的疑似病例，需进行肌肉组织病理学检查。典型表现为肌纤维大小不一、坏死与再生并存，免疫组化显示抗肌萎缩蛋白完全缺失。
当出现运动发育迟缓、腓肠肌假性肥大等症状时，建议及时至儿童神经内科就诊。确诊后需进行遗传咨询，家族成员应接受携带者筛查，孕期可通过产前诊断预防再发风险。