体内乙酰胆碱水平是否正常通常可以通过实验室检测、临床症状评估以及功能测试进行判断。由于乙酰胆碱代谢较快，临床常结合多种方法综合分析，建议在专业医疗机构进行检测。
1、实验室检测
乙酰胆碱在体内主要通过酶解代谢，直接检测其浓度较为困难。临床可采集血液或脑脊液样本，利用高效液相色谱等技术测定乙酰胆碱及其代谢产物的水平。但由于其在体内半衰期仅数秒，样本采集和保存条件要求极高，实际应用较少。
2、临床症状评估
乙酰胆碱水平异常可能引发肌力减弱、胃肠蠕动减慢、记忆力下降等症状。医生会通过神经系统查体，观察是否存在瞳孔对光反射异常、肌肉震颤等体征。重症肌无力患者因神经肌肉接头处乙酰胆碱受体减少，会出现特征性疲劳性肌无力现象。
3、功能测试
新斯的明试验是常用的功能性检测方法，通过注射乙酰胆碱酯酶抑制剂后观察肌力改善情况。神经传导速度测定可评估神经肌肉传导功能，瞳孔对乙酰胆碱的敏感性测试也能间接反映胆碱能系统状态。对于认知功能障碍患者，还可进行记忆量表评估。
检测乙酰胆碱相关指标需在神经内科或专科医院进行。部分检测需要特殊设备支持，如单纤维肌电图检测神经肌肉传导功能。若出现疑似胆碱能系统异常的症状，建议及时就诊，医生会根据具体临床表现选择适宜的检测方案。检测前应避免服用影响胆碱能系统的药物，并遵医嘱做好检测准备。