利福平属于人工半合成的抗生素类药物，具有广谱抗菌作用。其通过抑制细菌的RNA聚合酶活性，阻断细菌RNA的转录过程，从而达到杀菌效果。临床上常用于结核病、麻风病的联合治疗，也可用于某些革兰氏阳性菌或阴性菌感染。
利福平主要通过干扰细菌遗传物质的合成来发挥作用。它能特异性地结合细菌RNA聚合酶的β亚基，使该酶失去活性，导致细菌无法转录生成蛋白质合成所需的RNA。由于其对结核分枝杆菌有高度抗菌活性，常作为抗结核治疗的一线药物，但需与其他抗结核药联用以减少耐药性产生。
使用利福平需严格遵循医嘱，治疗结核病时通常需要连续用药6-9个月。该药物可能引起肝功能异常、消化道不适等不良反应，用药期间需定期监测肝功能。利福平会使体液变成橘红色属正常现象，但若出现皮肤黄染、严重腹痛等症状应及时就医。