青霉素作为β-内酰胺类抗生素，主要适用于敏感菌引起的链球菌感染、肺炎球菌感染、脑膜炎球菌感染、梅毒螺旋体感染及敏感葡萄球菌感染等疾病。其通过抑制细菌细胞壁合成发挥杀菌作用。
1、链球菌感染
青霉素对A组β-溶血性链球菌引起的咽炎、扁桃体炎等上呼吸道感染效果显著，也可用于治疗猩红热、丹毒等皮肤感染。对于B组链球菌引起的新生儿败血症，青霉素仍是首选药物。
2、肺炎球菌感染
针对青霉素敏感株引起的肺炎、中耳炎、鼻窦炎等感染，青霉素可有效杀灭病原体。但对于耐药肺炎链球菌感染，需根据药敏结果调整治疗方案。
3、脑膜炎球菌感染
青霉素能透过血脑屏障，对脑膜炎奈瑟菌引起的流行性脑脊髓膜炎具有治疗作用，常与磺胺类药物联合使用。
4、梅毒螺旋体感染
苄星青霉素是各期梅毒的首选药物，对早期梅毒的病原体清除率超过95%。对于神经梅毒需采用大剂量青霉素静脉给药。
5、敏感葡萄球菌感染
尽管90%以上的金黄色葡萄球菌已产生青霉素酶，但对青霉素敏感的菌株引起的感染，如某些皮肤软组织感染，仍可使用青霉素治疗。
使用青霉素前必须进行皮试，阴性者方可使用。治疗过程中需完成规定疗程，避免随意停药导致病情反复或耐药菌产生。对于肾功能不全患者需调整剂量，用药期间需定期监测肝肾功能。