青霉素V钾片作为青霉素类抗生素，主要用于治疗敏感菌引起的感染性疾病，如链球菌感染、肺炎球菌感染、葡萄球菌感染、预防风湿热复发以及其他细菌感染等。其作用机制是通过抑制细菌细胞壁合成发挥杀菌效果。
1、链球菌感染
青霉素V钾片对A组溶血性链球菌引起的咽炎、扁桃体炎等上呼吸道感染效果显著。该药物能有效穿透感染部位的生物膜，干扰链球菌细胞壁肽聚糖交联，导致菌体溶解。对于猩红热、丹毒等皮肤软组织感染也具有良好疗效。
2、肺炎球菌感染
该药对青霉素敏感肺炎链球菌引起的肺炎、中耳炎等疾病有治疗作用。通过结合细菌青霉素结合蛋白，抑制其转肽酶活性，阻止细胞壁完整性的维持。但对于青霉素耐药菌株需换用其他抗生素。
3、葡萄球菌感染
仅对产青霉素酶阴性葡萄球菌有效，可治疗敏感菌株引起的皮肤感染、伤口感染等。由于90%以上金黄色葡萄球菌产酶，实际临床使用需参照药敏试验结果。
4、预防风湿热复发
作为风湿热二级预防的首选药物，可通过持续抑制咽喉部链球菌定植，降低抗原抗体反应风险。推荐小剂量长期服用，疗程可达数年。
5、其他细菌感染
对螺旋体感染如梅毒、钩端螺旋体病，以及放线菌病等也有应用。通过干扰螺旋体细胞壁代谢，可有效控制病情进展，但需注意梅毒治疗需使用长效青霉素制剂。
使用该药物前需进行青霉素皮试，过敏体质者禁用。治疗期间应遵医嘱足疗程用药，避免随意停药导致细菌耐药。若用药3天后症状无改善或出现皮疹、呼吸困难等不良反应，应立即停药并就医。细菌培养和药敏试验是合理用药的重要依据。